一、病原學(xué)研究及成果
1.布魯氏菌菌型分布研究
1953~2005年全區(qū)對分離出的2 126株布魯氏菌進(jìn)行了菌型鑒定,其中羊種菌1 604株,牛種菌445株,豬種菌15株,犬種菌1株,非典型菌4株,粗糙型菌2株,未定種55株。生物學(xué)分型有羊種1型、2型、3型,牛種1型、3型、6型、9型,豬種1型,共4個種9個生物型。
通過毒力試驗對各菌型進(jìn)行了毒力測定。毒力試驗證明,未變異的羊種菌絕大部分是強(qiáng)毒菌,個別地區(qū)(如哲盟科左中旗敖本臺公社)也檢出了弱毒菌。已變異的羊種菌大部分是弱毒菌,也有少數(shù)強(qiáng)毒菌,變異菌呈強(qiáng)毒較為少見。牛種未變異菌多為弱毒,強(qiáng)毒菌多是牛3型。
2.布魯氏菌生長特性的觀察研究
通過觀察研究發(fā)現(xiàn),3種菌在pH值為6.6~7.2的培養(yǎng)基上生長最好,在培養(yǎng)基加入羊血紅蛋白溶液時,布魯氏菌培養(yǎng)陽性率比常用的Castanede法提高28.9%,出菌時間平均縮短2~3天。
通過布魯氏菌對數(shù)生長曲線研究試驗證明,3種菌在
此外,在病原學(xué)研究中研究人員還進(jìn)行了布魯氏菌生存力及消毒試驗,病羊排菌期試驗和布氏菌噬菌體的分離等觀察與研究,取得并積累了豐富的科學(xué)數(shù)據(jù)及資料。1978年全區(qū)在哲里木盟科左中旗敖本臺鄉(xiāng)檢菌查源,一次由正產(chǎn)胎盤、流產(chǎn)材料中分離出羊、牛、豬、非典型布魯氏菌142株,這在國際上也是十分罕見的。
二、菌苗免疫研究及成果
1.豬型2號菌苗的研制與應(yīng)用
為了尋找能夠適用于多種家畜免疫使用的菌苗,20世紀(jì)60年代初期,自治區(qū)布魯氏菌病防治研究所用農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)生物藥品監(jiān)察所(現(xiàn)中國獸藥監(jiān)察所)已經(jīng)選育成功的豬型2號菌苗,對內(nèi)蒙古的土種山羊進(jìn)行了菌苗注射,發(fā)現(xiàn)其對山羊的保護(hù)率達(dá)82%,比19號菌苗高,對牛和綿羊的保護(hù)率不低于19號菌苗。
豬型2號菌苗注射方法不適宜內(nèi)蒙古地區(qū)大面積推廣應(yīng)用。從1967年開始,內(nèi)蒙古布魯氏菌病防治研究所、內(nèi)蒙古獸醫(yī)站與中國獸藥監(jiān)察所協(xié)作,經(jīng)過4年不懈的工作,試驗成功了口服免疫法。實驗證明,該法的免疫保護(hù)率綿羊為82.7%,山羊為78.8%,牛為71.4%,豬為70.9%,用于懷孕母畜也安全有效。1971年錫林郭勒盟正白旗用7天的時間完成了全旗416 004頭(只)畜間豬型2號菌苗口服免疫任務(wù);烏蘭察布盟化德縣在3天內(nèi)就完成了全縣167 614頭(只)牲畜的畜間口服免疫任務(wù),免疫密度達(dá)到了99.3%。從推行這種口服免免疫法至1981年,全區(qū)共免疫成年羊1.5億只次。
1973~1975年,研究人員通過在觀察地區(qū)收集胎羔、胎盤等材料,對口服免疫法預(yù)防效果進(jìn)行了檢測評估。通過對收集的29 258份胎羔、胎盤等材料進(jìn)行布氏菌檢查,1973年、1974年分別只檢出5株和3株羊種布魯氏菌,1975年一株布魯氏菌也未分離出來,證明現(xiàn)場使用預(yù)防效果是有效的。
為了進(jìn)一步改進(jìn)豬型2號菌苗的免疫程序,1978年以后,通過進(jìn)行羔羊、犢牛免疫期試驗,為5~6個月齡的羔羊一次口服100億菌體的豬型2號菌苗,使其在懷孕1~4胎時對強(qiáng)毒菌攻擊的保護(hù)率分別達(dá)到了93%、80%、73%和66%,實現(xiàn)了羔羊只要服苗一次即可達(dá)到終身免疫(一般羊飼養(yǎng)5~6年即淘汰)。
研究人員還給6~11個月齡的犢牛一次口服500億菌體的豬型2號菌苗,實施強(qiáng)毒菌攻擊,在對照組全部流產(chǎn)的情況下,服苗牛的保護(hù)力第1胎為5/7,第2胎為4/5,第3胎為3/5,證明抗布魯氏菌性流產(chǎn)的效果是明顯的。自1982年推廣對羔羊、犢牛實行一次免疫后,為保證幼畜免疫用苗,全區(qū)每年下發(fā)1500萬頭(只)份菌苗,提高了預(yù)防效果。
2.S105菌苗菌株的選育
為尋找更加安全有效的免疫菌苗,內(nèi)蒙古地方病防治研究所與北京生物制品研究所合作,應(yīng)用硫酸二乙酯(DES)化學(xué)劑處理豬型2號菌苗菌株,減毒誘變育種,選育出了S105菌株,經(jīng)用小白鼠、豚鼠、羊和豬做試驗,證明該菌株的毒力較豬型2號菌苗菌株低,而且穩(wěn)定性、免疫源性不低于豬型2號菌苗,給孕羊注射不會引起流產(chǎn),安全有效。
3.M111菌苗菌株的選育
為區(qū)別人工免疫與自然感染的畜群,內(nèi)蒙古地方病防治研究所與內(nèi)蒙古獸醫(yī)工作站聯(lián)合研究培育出無凝集源性菌苗M111,它是由布氏菌粗糙型菌中選出的菌株,經(jīng)過誘變減毒,免疫后不產(chǎn)生光滑型(S)抗體(自然界中布氏菌大都是光滑型菌,產(chǎn)生光滑型抗體),已進(jìn)行了安全試驗、劑量試驗、大面積的免疫應(yīng)用試驗。
4.提取特異性布魯氏菌免疫核糖核酸(IRNA)
內(nèi)蒙古地方病防治研究所于1979年成功地提取出特異性布魯氏菌的免疫核糖核酸(IRNA),并通過動物試驗證明提取出的免疫核糖核酸(IRNA)確實具有活性和免疫信息,治療慢性布魯氏菌病有一定效果。
三、實驗診斷新技術(shù)試驗研究
1979年內(nèi)蒙古地方病防治研究所成功地提取了辣根過氧化物酶,并用其分別對256例臨床已經(jīng)確診的布魯氏菌病患者和170名疑似布魯氏菌病患者進(jìn)行了酶聯(lián)免疫吸附試驗檢查,結(jié)果陽性率分別為93%和61.2%,說明應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢查布魯氏菌病有較高的特異性和敏感性。
內(nèi)蒙古地方病防治研究所還應(yīng)用葡萄球菌A蛋白(SPA)代替抗人球蛋白做抗體檢查試驗,在為587名布魯氏菌病患者應(yīng)用葡萄球菌A蛋白(SPA)做抗體檢查后發(fā)現(xiàn),兩種方法總符合率基本一致,說明葡萄球菌A蛋白(SPA)完全可以代替抗人球蛋白做抗體檢查。而葡萄球菌A蛋白(SPA)制備方法簡單,價格低廉,使用方便,易于推廣,并能縮短檢查所需的時間。
四、發(fā)病機(jī)理研究及成果
多年來,全區(qū)的地方病防治和科研人員應(yīng)用細(xì)菌學(xué)、血清學(xué),免疫學(xué)等方法,對布魯氏菌病的發(fā)病機(jī)理進(jìn)行了深入的探討和研究。
1.體液免疫在發(fā)病機(jī)理中的作用
研究結(jié)果顯示,急性期和慢性期布魯氏菌病患者總補(bǔ)體(CH50)的含量和補(bǔ)體3(C3)的含量較正常人低,血清溶菌酶含量變化曲線與檢出菌結(jié)果一致。這說明,機(jī)體帶菌時血清溶菌酶活性升高,疾病處于恢復(fù)階段時溶菌酶下降。也就是說,溶菌酶的變化,從某種意義上講,是機(jī)體疾病狀態(tài)及變化的一種反映。
通過測定免疫球蛋白的水平,發(fā)現(xiàn)特異性抗布氏菌IgG、IgM、和IgA都具有凝集活性,其中IgM型抗體首先出現(xiàn),接著出現(xiàn)的是IgM型抗體,IgG型抗體出現(xiàn)較晚,它和血清總凝集活性下降相一致。
通過觀察血清殺菌力,證實了實驗性豚鼠布魯氏菌病陽性血清有明顯的抑菌作用。
2.細(xì)胞免疫在發(fā)病機(jī)理中的地位
以下試驗研究顯示:細(xì)胞免疫在布魯氏病發(fā)病過程中起著重要的作用。
通過觀察研究發(fā)現(xiàn),急慢性期布魯氏菌病患者,淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率較正常人低,E玫瑰花形成率基本上在正常范圍,致敏的淋巴細(xì)胞和特異性轉(zhuǎn)移因子可成功地轉(zhuǎn)移給陰性受體,致敏的淋巴細(xì)胞在特異抗原刺激下可釋放移動抑制因子和有絲分裂因子。
實驗動物和布魯氏菌病患者免疫機(jī)體狀態(tài)研究顯示,布魯氏菌病患者淋巴細(xì)胞的數(shù)量雖無明顯變化,但其功能顯著降低。
為了深入研究淋巴細(xì)胞亞群的變化規(guī)律和特點(diǎn),研究人員用刀豆蛋白A(ConA)和花豆血凝素(PHA)激活T細(xì)胞位點(diǎn)不同的原理,測定了慢性期布魯氏菌病患者T細(xì)胞的亞群,證實抑制型和輔助型T細(xì)胞功能呈等比例降低。
五、病理學(xué)研究及成果
20世紀(jì)50年代后期,內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院對死于布魯氏菌性心臟病和布魯氏菌性神經(jīng)系統(tǒng)病患者尸體進(jìn)行了解剖,證實布魯氏菌病患者可發(fā)生潰瘍性疣贅性心內(nèi)膜炎、心肌炎,心包炎,血管炎,腦脊髓膜炎和腦脊髓實質(zhì)性改變。
20世紀(jì)70年代以后,內(nèi)蒙古地方病防治研究所、內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院等單位先后進(jìn)行了布魯氏菌強(qiáng)毒菌和菌苗菌株感染豚鼠的病理形態(tài)動態(tài)觀察,豬型2號菌苗免疫牛、羊和實驗對照動物的病理改變比較,并應(yīng)用過氧化物酶標(biāo)記抗體,對豬型2號菌苗免疫羔羊組織內(nèi)免疫球蛋白的定位及形態(tài)學(xué)觀察,以及家兔感染牛、羊、豬種布氏菌后病理改變等項工作,證實了強(qiáng)毒菌株和菌苗菌均能引起本質(zhì)上相同的病理變化,但在病變程度上有差異。豚鼠的病變是經(jīng)過變質(zhì)、滲出、增生和硬化這樣一個過程而告終,這與臨床經(jīng)過一致;豬型2號菌苗免疫牛羊,機(jī)體可產(chǎn)生良好的組織學(xué)反應(yīng),不引起嚴(yán)重的病理損傷,所產(chǎn)生的抗體主要是IgG型;三種菌對家兔所致病理損傷以豬種菌最為明顯,并多有嚴(yán)重的壞死和化膿。
1978~2005年,全區(qū)布魯氏菌病防治工作者圍繞布魯氏菌病防控所進(jìn)行的科學(xué)研究或?qū)嶒炚{(diào)查,共計有16項獲省部級以上表彰獎勵或科技進(jìn)步成果獎。
一、病原學(xué)研究及成果
1.布魯氏菌菌型分布研究
1953~2005年全區(qū)對分離出的2 126株布魯氏菌進(jìn)行了菌型鑒定,其中羊種菌1 604株,牛種菌445株,豬種菌15株,犬種菌1株,非典型菌4株,粗糙型菌2株,未定種55株。生物學(xué)分型有羊種1型、2型、3型,牛種1型、3型、6型、9型,豬種1型,共4個種9個生物型。
通過毒力試驗對各菌型進(jìn)行了毒力測定。毒力試驗證明,未變異的羊種菌絕大部分是強(qiáng)毒菌,個別地區(qū)(如哲盟科左中旗敖本臺公社)也檢出了弱毒菌。已變異的羊種菌大部分是弱毒菌,也有少數(shù)強(qiáng)毒菌,變異菌呈強(qiáng)毒較為少見。牛種未變異菌多為弱毒,強(qiáng)毒菌多是牛3型。
2.布魯氏菌生長特性的觀察研究
通過觀察研究發(fā)現(xiàn),3種菌在pH值為6.6~7.2的培養(yǎng)基上生長最好,在培養(yǎng)基加入羊血紅蛋白溶液時,布魯氏菌培養(yǎng)陽性率比常用的Castanede法提高28.9%,出菌時間平均縮短2~3天。
通過布魯氏菌對數(shù)生長曲線研究試驗證明,3種菌在
此外,在病原學(xué)研究中研究人員還進(jìn)行了布魯氏菌生存力及消毒試驗,病羊排菌期試驗和布氏菌噬菌體的分離等觀察與研究,取得并積累了豐富的科學(xué)數(shù)據(jù)及資料。1978年全區(qū)在哲里木盟科左中旗敖本臺鄉(xiāng)檢菌查源,一次由正產(chǎn)胎盤、流產(chǎn)材料中分離出羊、牛、豬、非典型布魯氏菌142株,這在國際上也是十分罕見的。
二、菌苗免疫研究及成果
1.豬型2號菌苗的研制與應(yīng)用
為了尋找能夠適用于多種家畜免疫使用的菌苗,20世紀(jì)60年代初期,自治區(qū)布魯氏菌病防治研究所用農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)生物藥品監(jiān)察所(現(xiàn)中國獸藥監(jiān)察所)已經(jīng)選育成功的豬型2號菌苗,對內(nèi)蒙古的土種山羊進(jìn)行了菌苗注射,發(fā)現(xiàn)其對山羊的保護(hù)率達(dá)82%,比19號菌苗高,對牛和綿羊的保護(hù)率不低于19號菌苗。
豬型2號菌苗注射方法不適宜內(nèi)蒙古地區(qū)大面積推廣應(yīng)用。從1967年開始,內(nèi)蒙古布魯氏菌病防治研究所、內(nèi)蒙古獸醫(yī)站與中國獸藥監(jiān)察所協(xié)作,經(jīng)過4年不懈的工作,試驗成功了口服免疫法。實驗證明,該法的免疫保護(hù)率綿羊為82.7%,山羊為78.8%,牛為71.4%,豬為70.9%,用于懷孕母畜也安全有效。1971年錫林郭勒盟正白旗用7天的時間完成了全旗416 004頭(只)畜間豬型2號菌苗口服免疫任務(wù);烏蘭察布盟化德縣在3天內(nèi)就完成了全縣167 614頭(只)牲畜的畜間口服免疫任務(wù),免疫密度達(dá)到了99.3%。從推行這種口服免免疫法至1981年,全區(qū)共免疫成年羊1.5億只次。
1973~1975年,研究人員通過在觀察地區(qū)收集胎羔、胎盤等材料,對口服免疫法預(yù)防效果進(jìn)行了檢測評估。通過對收集的29 258份胎羔、胎盤等材料進(jìn)行布氏菌檢查,1973年、1974年分別只檢出5株和3株羊種布魯氏菌,1975年一株布魯氏菌也未分離出來,證明現(xiàn)場使用預(yù)防效果是有效的。
為了進(jìn)一步改進(jìn)豬型2號菌苗的免疫程序,1978年以后,通過進(jìn)行羔羊、犢牛免疫期試驗,為5~6個月齡的羔羊一次口服100億菌體的豬型2號菌苗,使其在懷孕1~4胎時對強(qiáng)毒菌攻擊的保護(hù)率分別達(dá)到了93%、80%、73%和66%,實現(xiàn)了羔羊只要服苗一次即可達(dá)到終身免疫(一般羊飼養(yǎng)5~6年即淘汰)。
研究人員還給6~11個月齡的犢牛一次口服500億菌體的豬型2號菌苗,實施強(qiáng)毒菌攻擊,在對照組全部流產(chǎn)的情況下,服苗牛的保護(hù)力第1胎為5/7,第2胎為4/5,第3胎為3/5,證明抗布魯氏菌性流產(chǎn)的效果是明顯的。自1982年推廣對羔羊、犢牛實行一次免疫后,為保證幼畜免疫用苗,全區(qū)每年下發(fā)1500萬頭(只)份菌苗,提高了預(yù)防效果。
2.S105菌苗菌株的選育
為尋找更加安全有效的免疫菌苗,內(nèi)蒙古地方病防治研究所與北京生物制品研究所合作,應(yīng)用硫酸二乙酯(DES)化學(xué)劑處理豬型2號菌苗菌株,減毒誘變育種,選育出了S105菌株,經(jīng)用小白鼠、豚鼠、羊和豬做試驗,證明該菌株的毒力較豬型2號菌苗菌株低,而且穩(wěn)定性、免疫源性不低于豬型2號菌苗,給孕羊注射不會引起流產(chǎn),安全有效。
3.M111菌苗菌株的選育
為區(qū)別人工免疫與自然感染的畜群,內(nèi)蒙古地方病防治研究所與內(nèi)蒙古獸醫(yī)工作站聯(lián)合研究培育出無凝集源性菌苗M111,它是由布氏菌粗糙型菌中選出的菌株,經(jīng)過誘變減毒,免疫后不產(chǎn)生光滑型(S)抗體(自然界中布氏菌大都是光滑型菌,產(chǎn)生光滑型抗體),已進(jìn)行了安全試驗、劑量試驗、大面積的免疫應(yīng)用試驗。
4.提取特異性布魯氏菌免疫核糖核酸(IRNA)
內(nèi)蒙古地方病防治研究所于1979年成功地提取出特異性布魯氏菌的免疫核糖核酸(IRNA),并通過動物試驗證明提取出的免疫核糖核酸(IRNA)確實具有活性和免疫信息,治療慢性布魯氏菌病有一定效果。
三、實驗診斷新技術(shù)試驗研究
1979年內(nèi)蒙古地方病防治研究所成功地提取了辣根過氧化物酶,并用其分別對256例臨床已經(jīng)確診的布魯氏菌病患者和170名疑似布魯氏菌病患者進(jìn)行了酶聯(lián)免疫吸附試驗檢查,結(jié)果陽性率分別為93%和61.2%,說明應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢查布魯氏菌病有較高的特異性和敏感性。
內(nèi)蒙古地方病防治研究所還應(yīng)用葡萄球菌A蛋白(SPA)代替抗人球蛋白做抗體檢查試驗,在為587名布魯氏菌病患者應(yīng)用葡萄球菌A蛋白(SPA)做抗體檢查后發(fā)現(xiàn),兩種方法總符合率基本一致,說明葡萄球菌A蛋白(SPA)完全可以代替抗人球蛋白做抗體檢查。而葡萄球菌A蛋白(SPA)制備方法簡單,價格低廉,使用方便,易于推廣,并能縮短檢查所需的時間。
四、發(fā)病機(jī)理研究及成果
多年來,全區(qū)的地方病防治和科研人員應(yīng)用細(xì)菌學(xué)、血清學(xué),免疫學(xué)等方法,對布魯氏菌病的發(fā)病機(jī)理進(jìn)行了深入的探討和研究。
1.體液免疫在發(fā)病機(jī)理中的作用
研究結(jié)果顯示,急性期和慢性期布魯氏菌病患者總補(bǔ)體(CH50)的含量和補(bǔ)體3(C3)的含量較正常人低,血清溶菌酶含量變化曲線與檢出菌結(jié)果一致。這說明,機(jī)體帶菌時血清溶菌酶活性升高,疾病處于恢復(fù)階段時溶菌酶下降。也就是說,溶菌酶的變化,從某種意義上講,是機(jī)體疾病狀態(tài)及變化的一種反映。
通過測定免疫球蛋白的水平,發(fā)現(xiàn)特異性抗布氏菌IgG、IgM、和IgA都具有凝集活性,其中IgM型抗體首先出現(xiàn),接著出現(xiàn)的是IgM型抗體,IgG型抗體出現(xiàn)較晚,它和血清總凝集活性下降相一致。
通過觀察血清殺菌力,證實了實驗性豚鼠布魯氏菌病陽性血清有明顯的抑菌作用。
2.細(xì)胞免疫在發(fā)病機(jī)理中的地位
以下試驗研究顯示:細(xì)胞免疫在布魯氏病發(fā)病過程中起著重要的作用。
通過觀察研究發(fā)現(xiàn),急慢性期布魯氏菌病患者,淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率較正常人低,E玫瑰花形成率基本上在正常范圍,致敏的淋巴細(xì)胞和特異性轉(zhuǎn)移因子可成功地轉(zhuǎn)移給陰性受體,致敏的淋巴細(xì)胞在特異抗原刺激下可釋放移動抑制因子和有絲分裂因子。
實驗動物和布魯氏菌病患者免疫機(jī)體狀態(tài)研究顯示,布魯氏菌病患者淋巴細(xì)胞的數(shù)量雖無明顯變化,但其功能顯著降低。
為了深入研究淋巴細(xì)胞亞群的變化規(guī)律和特點(diǎn),研究人員用刀豆蛋白A(ConA)和花豆血凝素(PHA)激活T細(xì)胞位點(diǎn)不同的原理,測定了慢性期布魯氏菌病患者T細(xì)胞的亞群,證實抑制型和輔助型T細(xì)胞功能呈等比例降低。
五、病理學(xué)研究及成果
20世紀(jì)50年代后期,內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院對死于布魯氏菌性心臟病和布魯氏菌性神經(jīng)系統(tǒng)病患者尸體進(jìn)行了解剖,證實布魯氏菌病患者可發(fā)生潰瘍性疣贅性心內(nèi)膜炎、心肌炎,心包炎,血管炎,腦脊髓膜炎和腦脊髓實質(zhì)性改變。
20世紀(jì)70年代以后,內(nèi)蒙古地方病防治研究所、內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院等單位先后進(jìn)行了布魯氏菌強(qiáng)毒菌和菌苗菌株感染豚鼠的病理形態(tài)動態(tài)觀察,豬型2號菌苗免疫牛、羊和實驗對照動物的病理改變比較,并應(yīng)用過氧化物酶標(biāo)記抗體,對豬型2號菌苗免疫羔羊組織內(nèi)免疫球蛋白的定位及形態(tài)學(xué)觀察,以及家兔感染牛、羊、豬種布氏菌后病理改變等項工作,證實了強(qiáng)毒菌株和菌苗菌均能引起本質(zhì)上相同的病理變化,但在病變程度上有差異。豚鼠的病變是經(jīng)過變質(zhì)、滲出、增生和硬化這樣一個過程而告終,這與臨床經(jīng)過一致;豬型2號菌苗免疫牛羊,機(jī)體可產(chǎn)生良好的組織學(xué)反應(yīng),不引起嚴(yán)重的病理損傷,所產(chǎn)生的抗體主要是IgG型;三種菌對家兔所致病理損傷以豬種菌最為明顯,并多有嚴(yán)重的壞死和化膿。
1978~2005年,全區(qū)布魯氏菌病防治工作者圍繞布魯氏菌病防控所進(jìn)行的科學(xué)研究或?qū)嶒炚{(diào)查,共計有16項獲省部級以上表彰獎勵或科技進(jìn)步成果獎。